藏药材纤毛婆婆纳的基源考证

纤毛婆婆纳(Veronica Ciliata Fisch.),玄参科,婆婆纳属,一年生草本, 其全草形态见图1。在中华本草藏药卷中有记载,对其品种考证主要有多处记载。《度母本草》云:生于阴坡黑土上,跟小茎长,叶小而绿色,花蓝色,聚生似堆砌;《蓝琉璃》云:帕下嘎分上、下两品种,下品处处可生,根茎叶等物均似黄花香,花蓝色;《鲜明注释》云:帕下嘎门巴下品属草类,茎长约一卡,茎及叶背紫色,花淡蓝色,无上品帕下嘎时,以此可代之入药;《甘露本草明镜》云:多年生草本,根褐色,具茎须,全株被灰白色柔毛,细而短,但林芝等处所生者长约一肘,叶小对生,披针形,叶柄短,叶背紫红色,边缘具细齿,花密集,排成头状顶生花序,花小,蓝紫色。藏医用纤毛婆婆纳作为帕下嘎门巴的原植物用药,其根须状,茎细长,叶绿色,叶背紫色,全株被毛,花紫色,密集成头状花序,与上述文献记载相符,应为正品。用药来源为玄参科植物长果婆婆纳的全草,原植物为纤毛婆婆纳,长约20厘米,全株被灰白色柔毛,茎直立,细而坚挺,多比分枝,叶对生,无柄,叶片卵形或卵状菱针形,长2-4cm,宽0.5-1cm边有锯齿,上面绿色,下面淡紫褐色,花密集排成顶生头状花序,密被白色长柔毛,花小,蓝紫色,苞片与萼近等长;萼片,长圆形;花瓣较宽广,蒴果卵状长圆形,被毛,顶端有凹陷,生于海拔2500-4500m的高山草甸,河滩及灌木丛下或田野旁,分布于西藏,青海,云南,四川等地。6-9月采全草。《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》中记载:其可清热解毒,止咳。用于流行性感冒,肝炎等。药用方式:内服、煎汤,推荐用量2.5-5g;或入丸,敷。外用:适量。

化学成分的分析与分离

图1 纤毛婆婆纳全草

化学成分的分析与分离

目前,已有研究对纤毛婆婆纳的化学成分进行初步的分离与分析。卢秋霞等人建立[1]UPLC-PDA方法同时定量纤毛婆婆纳乙酸乙酯相(EAFVC)中的两种主要成分;高坤等人[2]利用传统柱层析:薄层色谱、硅胶柱、凝胶柱、重结晶等方法从其醇提物中分离得到5种单萜环烯醚萜苷类化合物和3种苯甲酸衍生物;尹利等人[3]经抗氧化活性筛选发现EAFVC为其活性部位,并利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱粗分,利用Semi-prep-HPLC进一步纯化分离得到23种化合物,其中包括15种环烯醚萜苷以及8种酚类化合物,初步说明环烯醚萜苷类以及多酚类化合物是EAFVC的主要化合物;卢秋霞等人[4]首次建立了UPLC分析方法,分析EAFVC中的主要化学成分,并利用HSCCC结合Semi-prep-HPLC从EAFVC中分离得到五种主要化合物,分别为梓苷、verproside、木犀草素、原儿茶酸和对羟基苯甲酸,本研究首次采用高效快速的HSCCC分离EAFVC中的成分,提高了分离的效率以及化合物的得率。

药理活性

抗氧化活性

尹利等人[5]利用1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基清除、2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除、还原力、亚硝酸盐清除、超氧自由基清除、抑制胡萝卜素漂白等多种抗氧化实验评估了纤毛婆婆纳水提取物、95%乙醇提取物、95%乙醇提取物的石油醚相、EAFVC和正丁醇萃取相的抗氧化活性,结果表明95%乙醇提取物的抗氧化活性强于水提物,且95%乙醇提取物的EAFVC的抗氧化活性要强于石油醚萃取相和正丁醇萃取相;孙意冉等人[6]对EAFVC的OH•的清除能力进行测定,发现其对OH•有很好的清除作用;谭善财等人利用多种体外抗氧化活性体系(DPPH自由基、ABTS自由基、总还原力、亚硝酸盐、O2•−)评价了纤毛婆婆纳的环烯醚萜苷馏分的体外抗氧化活性,结果显示该馏分具有较强的清除自由基能力和较高的抗氧化活性;卢秋霞等人[4]比较了纤毛婆婆纳中的主要化合物的抗氧化活性,结果表明原儿茶酸的抗氧化活性最强,而对羟基苯甲酸的抗氧化活性最弱;主要的两种环烯醚萜苷具有一般的抗氧化活性。

抗肝癌活性

尹利等人[3]对纤毛婆婆纳中的主要环烯醚萜苷类化合物的抗肝癌活性进行探究,发现其对肝癌细胞增殖有较强的抑制作用。

体外保肝活性

孙意冉等人[6]建立了t-BHP诱导的人类肝癌细胞(HepG2)的损伤模型,首次验证了EAFVC 可以浓度依赖性的增加由t-BHP诱导的细胞活力的降低。进一步的研究表明EAFVC能降低ROS、DNA 损伤标志物(8-羟基脱氧鸟苷)、蛋白质损伤标志物(蛋白羰基)的产生,并改善肝功能和增加抗氧化酶的活力。此外,EAFVC 通过抑制Caspase-8和Caspase-3的激活来抑制t-BHP诱导的细胞凋亡的发生。

舒月悦等人[7]建立乙醇诱导的BRL 3A大鼠肝细胞(BRL 3A细胞)损伤模型,首次筛选了纤毛婆婆纳中单体化合物的保肝活性,结果表明木犀草素的保肝活性最强,说明木犀草素是纤毛婆婆纳的主要保肝活性成分。进一步的研究表明木犀草素可以能够依赖性的逆转乙醇诱导的细胞活力的降低、肝功能酶以及抗氧化酶的异常,降低MDA以及NO含量,同时抑制ROS的产生。机制研究表明木犀草素能够显著上调Nrf2以及其调控的抗氧化基因HO-1的表达;下调核因子活化B细胞κ轻链增强子(Nf-κb) 以及iNOS、Caspase-3、Caspase-9和Bax 基因的表达,综合说明木犀草素可以提高细胞的抗氧化能力,抑制细胞炎症以及凋亡从而发挥保肝作用。

体内保肝活性

尹利等人[5]建立CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型,阐明EAFVC可以逆转CCl4诱导的肝功能酶的异常,提高小鼠抗氧化酶的活力,减少MDA的产生;进一步的病理切片也显示EAFVC可以改善CCl4诱导的小鼠肝脏细胞坏死以及炎症,综合说明EAFVC能够有效的缓解CCl4诱导的小鼠急性肝损伤。

谭善财等人[8]建立APAP诱导的急性肝损伤模型,阐明纤毛婆婆纳提取物以及环烯醚萜苷馏分能够恢复肝功能酶抑制,抑制MDA产生,提高抗氧化酶活力。进一步的机制研究表明环烯醚萜苷部位可以抑制NF-κB以及TNF-α的表达从而发挥保肝功能。

参考文献

[1] 卢秋霞. 传统藏药材纤毛婆婆纳的主要成分分析与分离及其抗氧化和抗肝癌活性研究[D]. 四川大学, 2017.

[2] 高坤, 李旭琴, 刘安, 等. 西北高寒植物长果婆婆纳的化学成分[J]. 西北植物学报, 2003, (04):633-636.

[3] Yin L, Lu Q, Tan S, et al. Bioactivity-guided isolation of antioxidant and anti-hepatocarcinoma constituents from Veronica ciliata [J]. Chemistry central journal, 2016, 10(1): 27.

[4] Lu Q, Sun Y, Shu Y, et al. HSCCC Separation of the Two Iridoid Glycosides and Three Phenolic Compounds from Veronica ciliata and Their in Vitro Antioxidant and Anti-Hepatocarcinoma Activities [J]. Molecules, 2016, 21(9).

[5] Yin L, Wei L, Fu R, et al. Antioxidant and hepatoprotective activity of Veronica ciliata Fisch. extracts against carbon tetrachloride-induced liver injury in mice [J]. Molecules, 2014, 19.

[6] Sun Y, Lu Q, He L, et al. Active Fragment of Veronica ciliata Fisch. Attenuates t-BHP-Induced Oxidative Stress Injury in HepG2 Cells through Antioxidant and Antiapoptosis Activities [J]. Oxidative medicine and cellular longevity, 2017, 2017: 11.

[7] 舒月悦. 藏药纤毛婆婆纳保肝活性成分的筛选及木犀草素对酒精性肝细胞损伤的保护作用[D]. 四川大学, 2018.

[8] Tan S, Lu Q, Shu Y, et al. Iridoid Glycosides Fraction Isolated from Veronica ciliata Fisch. Protects against Acetaminophen-Induced Liver Injury in Mice [J]. Evidence-based complementary and alternative medicine, 2017, 2017: 11.

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